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药用植物种子的品质检验3
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3.2.6.3 剥胚法
将种子在清水中浸泡24h，使种皮软化，切开种皮，有胚乳的种子，还须将胚乳切开，用解剖刀和解剖针小心地取出胚。放在铺有湿润滤纸的培养皿内，每皿50粒，重复一次，放在20-25℃的温箱中，经2-10d后即可观察胚的生长情况。有生活力的胚在这段时间仍然坚实而呈白色，开始生长或转变为绿色；而死胚则变色腐烂。离体胚测定和TTC法测定一样比普通测定要快，但取胚时胚较易受伤。该法适于测定长度大于5mm种子的生活力。
3.2.6.4 荧光法
种子在衰老过程中，体内将产生一系列生理生化变化，导致化学成分在质和量上发生变化，活细胞的蛋白质、核酸和核苷酸等都具有荧光性质。用紫外线荧光灯照射剖切的种子，具有生活力的种子能发出蓝色、蓝紫色、紫色或蓝绿色的明亮荧光，而失去生活力的种子则显黄色、褐色或无色并带有黑斑和褐斑。检验时把种子纵切成两瓣（每个样品至少检验200粒），放在培养皿上，切面朝上，放在波长为254nm的紫外线荧光灯下照射并进行观察。种子距光源约10cm，观察种子剖面及滤纸上有无荧光反应。
3.2.7 种子活力及其测定方法
种子活力是指种子的健壮度，是种子质量的重要指标，是指在广泛的田间条件下，决定种子迅速整齐出苗和长成正常幼苗的潜在能力的总称。活力不同于发芽率，它们差别很大，一般种子发芽率高，并不等于其活力也高，而高活力的种子发芽率也一定高。活力不同于生活力，后者是指种子发芽的潜在能力或种胚所具有的生命力，通常指一批种子中具有生命力的种子数占种子总数的百分率。种子活力在生产上是很有用的指标。高活力的种子表现在以下几个方面：田间出苗率高且整齐、抵抗逆境能力强、对病虫杂草的竞争能力强、种子耐藏性高。
影响种子活力的因素很多，有遗传特性、栽培方法、气候条件、种子贮藏条件、种子处理等。测定种子活力的方法分为物理法、生理法、生化法。
3.2.7.1 物理方法
（1）种子大小与质量的测定 一般情况下，种子越大，粒重越高，活力也高。因此可以根据种子的大小和粒重来判断种子活力的大小。
（2）电导率测定 电导率测定法的原理是活力差的种子通常细胞膜有不同程度的破损，产生渗漏现象，细胞质可渗漏出来。种子浸泡在无离子水中时，种子中一些可溶性物质渗入水中，增加了溶液中的离子浓度，提高了浸泡液的电导率，根据电导率的高低，可以判断种子活力的高低。其方法是取一定量的种子（1-10g），用蒸馏水、无离子水反复冲洗几次，然后浸泡在10-30mL无离子水中，振荡后，放于30℃条件下静置3h，过滤，用电导率仪测定过滤出的浸泡液的电导率，电导率高的种子活力低，电导率低的种子活力高。
3.2.7.2 生化方法
（1）TTC定量测定法
应用TTC法，测定种子活力的原理与测定生活力的相同，但所使用的方法不同。测定种子活力采用定量法，测定生活力采用定性法。TTC溶液在pH值6-8范围内能达到较好的染色效果，用每升0.2mol的磷酸溶液配制成1%的TTC溶液，把种胚浸入TTC溶液一定时间后，取出种胚用丙酮匀浆，过滤，其上清液在分光光度计中于波长490nm下比色。根据光密度的高低来判断种子活力的大小。
现以用定量法测定绞股蓝种子的活力为例，取一定数量的绞股蓝种子，清水浸泡24h，分别取种子50粒，沿种子胚的中心线纵切成两部分，把一半种子放入垫有滤纸的培养皿中，倒入1%的TTC溶液，以盖没种子为度，把培养皿放入30℃的恒温培养箱中，定时检查种子的染色情况；把切开的另一半种子放在沸水中煮5min，同样条件下进行染色。以上各重复3次。染色56h后，发现绞股蓝种子的染色有明显的区别，分别取染成红色、浅红色、未染色的种子各7粒，用清水冲洗2-3次，剥去种皮，分别放入研钵中，加入适量的丙酮，研磨提取，倒入10mL的容量瓶中，再用丙酮冲洗研钵2-3次，定容并摇匀。把提取液分别倒入10mL的离心管中，在3000r/min的速度下离心5min，吸取上清液，用分光光度计测定光密度，波长为490nm，以丙酮作为空白对照。每7粒种子凡光密度值在0.129-0.135，为高活力的种子，种子能发芽；光密度值在0.025-0.028，为低活力的种子，种子也能够发芽；光密度值在0.004-0.007，为无活力的种子，种子不能发芽；种子煮沸杀死后的光密度值是0.001-0.002。把上述结果与种子的发芽率作对照，结果表明由定量法测定的绞股蓝种子活力与发芽结果相符。这个试验中绞股蓝种子染色时间较长，可能与种子内部结构致密性有关。在分析其他种子活力时，具体染色时间因种而异，通过研究确定合适的染色时间。
（2）幼苗生长率的测定
将不同活力的种子进行发芽，3d后观察测定幼苗高。幼苗越高表示活力越强。
（3）发芽指数和活力指数
Gi=Gt/Dt
式中：Gi--发芽指数；
Gt--t日的发芽数，粒；
Dt--发芽日数，d。
用常规发芽法，每天记载发芽数（如果发芽试验在一个月以上，可两天或数天记录一次），然后计算发芽指数。
例如：有两批种子，它们的发芽率都为90%，但是它们每天的发芽情况不同。
发芽日数1、2、3、4、5、6、7、8、9、10
A样品和B样品发芽数分别为：
A样品：6、4、8、12、19、11、17、3、5、5；
B样品：25、10、15、20、10、7、3、0、0、0。
样品A发芽指数(Gi)= + + + + + + +
+ + =23.3；
样品B发芽指数(Gi)= + + + + + + +
+ + =43.6。
由此可见，这两批种子的发芽率虽然相同，但发芽指数却是样品B大于样品A，结果表明B样品的活力高。从中我们可以看出发芽指数比发芽率更能反映种子的活力状况。
活力指数V=S·Gt/Dt
式中：S--幼苗的生长势，也就是在种子发芽几天后的
幼苗大小或干重。
一般选择第几天的幼苗可自由确定，但幼苗通常不宜太长。禾谷类种子宜选择中期幼苗。活力指数也就是幼苗生长势和发芽指数的积，它考虑的因素较多，是种子活力的很好指标。
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