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药用植物种子的品质检验 2
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3.2.5 种子发芽率和发芽势的测定
种子能否正常发芽是衡量种子是否具有生活力的直接指标，也是决定田间出苗率的最重要因素，对确定合理的播种量、改进种子贮藏方法、划分种子等级和确定合理的种子价格等具有重要意义。生产上所用的种子，不仅要具有旺盛的生活力，还要能在规定时期内和适宜条件下发芽迅速而整齐，并能达到较高的发芽率。
种子发芽率是指发芽试验终期或规定日期内，全部发芽种子数占供试种子数的百分率。种子发芽率是种子播种品质最重要的指标之一，发芽率高，表示有生活力的种子多，播种后出苗数多。
种子发芽势是指发芽试验初期，规定日期内正常发芽的种子数占供试种子数的百分率。种子发芽势高，表示种子生活力强，发芽整齐，出苗一致。种子发芽率和发芽势测定的具体步骤如下：
3.2.5.1 试样的数取
从经过净度测定的纯净种子中，随机数取100粒种子，供发芽测定之用，重复4次。种子大的可以50粒或25粒为一次重复。
3.2.5.2 发芽基质
发芽试验时，用来摆放种子，并供给种子水分和空气的衬垫物称为发芽基质。发芽基质可以是滤纸、纱布、细沙、珍珠岩、土壤等，使用时必须先经过消毒，也可以在滤纸下面垫上海绵或脱脂棉，以保证滤纸上温度均匀。一般小粒种子适宜放在滤纸上，大粒种子适宜放细沙等基质中。如五味子种子发芽试验一般是将其埋入细沙中1cm；龙胆草种子发芽试验方法是在培养皿中放入一层脱脂棉，其上用双层纱布覆盖，然后均匀放入龙胆草种子；防风种子发芽试验一般是将种子放入消过毒的土壤中，覆土厚度1cm左右。
3.2.5.3 种子的预处理
为了使种子尽快发芽，种子在摆放前，可用始温为45℃水浸种24h，如防风、甘草、柴胡等。对于种皮致密、透水性差的种子，需采用较高温度的水浸种，如相思子、山茱萸可用始温为100℃的水浸种2min，自然冷却24h；槐树、胡枝子用80℃水浸种，自然冷却24h；大巢菜、小巢菜可用60℃水浸种，自然冷却24h。有些种子在发芽试验前还需要在一定的低温条件下经过层积才能萌发，五味子需经过4-5个月的低温层积后，种子才能萌发，杜仲、山杏需要经过1个月5℃左右的低温层积才能萌发。山核桃需在0-5℃下层积60d，黄连木需在0-5℃下层积50d，浙贝母需在0-5℃下层积60d。五加科的人参、刺五加等则需长时间的低温层积和变温处理。
3.2.5.4 发芽的观察和记载
种子放置完毕后，在摆入种子的培养皿或其他发芽的容器上贴上标签，注明种子名称、开始试验日期、样品号、种子粒数。每天观察记载种子变化状况和发芽情况，并定时定量加水。对一些发芽持续时间较长的种子，可每隔3-4d观察一次。计算发芽率、发芽势。
发芽率= 发芽总粒数 ×100%
试验总粒数
发芽势= 规定天数内发芽总粒数 ×100%
试验总粒数
测定一些重要药用植物种子发芽率的条件见表3.1。
表3.1 一些重要药用植物发芽率的测定条件
品种 拉丁学名 发芽试验条件 测定发芽所需时间/d 预处理方法
发芽床 温度/℃ 光照
卫矛 Euonymus alatus 沙 10-12 - - 层积
人参 Panax ginseng 沙+腐殖土 22-17、
12-10、
0- 5的
季节变温 - 240 8月初
开始层积
苦参 Sophora flavescens 沙或土 15-30 - 5-10 层积
小茴香 Foeniculum vulgare 沙 15-25 - 10 -
大黄 Rheum officinale 沙 15-25 - 15
北五味子 Schisandra chinensis 沙 12-17 - 230 层积
王不流行 Vaccaria segetalis 沙 15-20 - 10 -
车前 Plantago asiatica 纸 25-30 光 15-20 -
龙胆草 Gentiana scabra 纸 26-28 光 10-16 -
地肤 Kochia scoparia 纸 15-30 - 5 -
地黄 Rehenannia glutinosa 纸 25-30 - 10 -
防己 Stephania tetrandra 沙 10-15 - 90 层积
防风 Saposhnikovia divaricata 沙 12-20变温 - 50 -
伊贝母 Fritillaria pallidiflora 纸或沙 5-7 - 250 层积
红花 Carthamus tinctorius 沙 15 - 15 -
沙参 Adenophora tetraphylla 纸 20-25 - 15 -
连翘 Forsythia suspensa 沙 30 - 20 -
知母 Anemarrhena asphodeloides 沙 20-30 - 20 -
穿心莲 Andrographis paniculata 纸 30 - 15 破皮
莨菪 Hyoscyamus niger 纸 20-30 - 20 -
黄芪 Astragalus membranaceus 纸 15-30 - 14 浸种
黄芩 Scutellaria baicalensis 纸 15-30 - 6-10 -
甘草 Glycyrrhiza uralensis 纸 15-30 - 5 -
桔梗 Platycodon grandifloum 纸 15-25 - 9 浸种
党参 Codonopsis pilosula 纸 15-20 - 5-11 -
穿龙薯芋 Dioscorea nipponica 土壤 15-30 - 30-50 层积
柴胡 Bupleurum chinense 纸 15-30 - 9 -
细辛 Asarum heterotropoides
Var. Mandshuricum 沙 19、
20-24
0-5 - 180-200 变温
月见草 Venothera erythrosepala 纸 15-30 - 5 -
3.2.6 种子生活力的测定
种子生活力是指种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力。药用植物种子寿命长短各异、很多种子休眠期较长，为了在短期内了解种子的品质，用测定发芽率的方法显然是不行的，一般采用生物化学的方法测定种子的生活力，以确定种子是否能用并估算播种量。
测定种子生活力的方法很多，其中以用四唑和靛红进行染色具有快速准确的效果。
3.2.6.1 四唑染色法
2，3，5-氯化（或溴化）三苯基四氮唑简称四唑，缩写为TTC，其染色原理是有生活力种子的胚细胞脱氢酶活性高，TTC接触到种子活的组织，被吸收的TTC参与了活细胞的还原作用，接受氢离子，被还原成为红色、稳定、不能扩散的三苯基甲酯。无生活力的种子无此反应。因此根据胚组织是否被染色及染色的深浅和多少来判断种子生活力的强弱。其具体步骤如下：
（1）溶液的配制 TTC为白色或淡黄色的有毒粉末，宜放在暗处低温下保存。用每升0.05-0.1mol pH7.5的磷酸缓冲液配制成0.1%-1%的TTC溶液，并调溶液的pH值至6.8-7.2，贮于棕色瓶内保存。
（2）染色 将种子在水中浸泡16-24h，待种皮软化后，沿种脊小心地通过胚中心将种子切成两瓣，放入烧杯或培养皿内，切面朝下，注入TTC溶液，浸没剖面，放入25-30℃温箱内染色8-24h。
（3）鉴定染色结果 经过染色的种子取出后，用清水冲洗净，放在白色滤纸上，逐粒观察胚和胚乳的染色情况。有生活力种子胚被染成红色，无生活力种子则不染色或仅有浅红色斑点。此法测定种子生活力不受种子休眠的影响，但受过冻害的种子用此测法不准。
3.2.6.2 靛红染色法
靛红[C16H8O2N2(SO3Na)2]一种苯胺染料，又称靛蓝-洋红。其原理是根据活细胞原生质有选择渗透的能力，某些苯胺染料不能进入活细胞内部，因此不染色，而死细胞原生质无此能力故被染成蓝色。根据染色部位和染色面积的大小来判断种子生活力，一般染色所使用的靛红溶液的质量分数为0.05%-0.1%，宜随配随用，其染色步骤与TTC法一致。但是在染色时必须注意，种子染色后，要立即进行观察，以免褪色，剥去种皮时，不要损伤胚组织。凡胚未染色者为无生活力的种子，凡种胚或子叶染成斑点状的为生活力弱的种子
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